Иммуноферментный тест основан на классическом «сэндвич» методе ИФА 2-го поколения. В нем используется высокоаффинная система биотин-стрептавидин. На лунках микропланшета адсорбирован стрептавидин. При первой инкубации образцы сыворотки, калибраторы или контроли, конъюгат (меченые пероксидазой антитела к ПЛ), а также биотинилированные моноклональные антитела к ПЛ смешиваются друг с другом, образуя при этом структуру типа «сэндвич», связанную с поверхностью лунок за счет взаимодействия биотина с иммобилизованным стрептавидином. После инкубации не связавшийся конъюгат и моноклональные антитела удаляются промывкой. Добавление в лунки субстрата (2 стадия) приводит к образованию окрашенного продукта, который меняет цвет на желтый при добавлении стоп-реагента, вносимого для остановки реакции. Интенсивность окраски измеряется фотометрически и пропорциональна концентрации ПЛ в пробе. Измерение оптической плотности калибраторов и образцов проводят на планшетном фотометре (например, HUMAREADER или ELISYS). Численное значение концентрации определяется с помощью калибровочной кривой