Kro I

MD ДНК эндонуклеаза Kro I.
Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует.
Сайт узнавания и позиция гидролиза:
GC(5mC)GGC G↑C(5mC)GGC
CGG(5mC)CG CGG(5mC)C↓G
Источник: Kocurea rosea 307
Определение единицы активности:
За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое дляполного гидролиза 1 мкг линейной формы плазмиды pMHpaII1/DriI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Субстрат для определения активности:
Субстрат pMHpaII1/DriI представляет собой ДНК плазмиды pMHpaII1, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pMHpaII1 содержит ген ДНК-метилтрасферазы M.HpaII, которая модифицирует сайт узнавания 5`-CCGG-3` с образованием
5`-C(5mC)GG-3`/3`-GG(5mC)C-5`,
и три сайта узнавания KroI
5`-GC(5mC)GGC-3`/3`-CGG(5mC)CG-5`.
Оптимальный буфер: SE-буфер G
Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:
B G O W Y ROSE
50 100 25 50 75 100
Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин, 200 мкг/мл BSA. Хранить при -20°С.
Лигирование:
Неспецифический гидролиз:
Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 1 ед фермента Kro I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.
Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК.
Не расщепляет немодифицированную ДНК и ДНК, метилированную MspI ДНК-метилтрансферазой.
С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.