Иммунология

Тест RIDASCREEN® Specific IgE ELISA основан на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Аллергены нанесены на целлюлозные диски, помещенные в лунки стрипов или микропланшета. Исследуемая сыворотка, стандартная сыворотка и положительный и отрицательный контроли вносят в лунки с дисками и инкубируют при 37 °С. В процессе инкубации присутствующие в образцах IgE-антитела, специфичные к определенному аллергену, связываются с иммобилизованным аллергеном, образуя комплекс антиген-антитело. IgE-антитела, не специфичные к данному аллергену, остаются несвязанными и удаляются на стадии промывки. На второй стадии добавляют антитела к IgE человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой. Избыток несвязанного конъюгата удаляют промывкой. Затем к дискам добавляют субстрат. В результате ферментативной реакции щелочной фосфатазы бесцветный субстрат превращается в продукт желтого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию IgE-антител человека в исследуемом образце сыворотки. Оценка результата реакции производится измерением оптической плотности на планшетном спектрофотометре при основной длине волны 405 нм и референсной длине волны 620 нм. Некоторые аллергены нанесены на целлюлозные диски в присутствии человеческого сывороточного альбумина (HSA). Для таких аллергенов следует использовать дополнительный диск с сорбированным HSA, чтобы учесть вклад неспецифического связывания с HSA на аллергодиске

Тест RIDASCREEN® Specific IgG ELISA основан на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Аллергены нанесены на целлюлозные диски, помещенные в лунки стрипов или микропланшета. Образцы сыворотки крови пациентов, стандартную сыворотку и отрицательный и положительный контроли наносят на аллергодиски и инкубируют при 37 оС. Во время инкубации специфические IgG-антитела связываются с аллергенами. Несвязавшиеся компоненты удаляют промывкой. После этого добавляют антитела к IgG-иммуноглобулинам человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой. Несвязавшийся конъюгат удаляют промывкой. Затем вносят раствор субстрата, который дефосфорилируется ферментным конъюгатом с образованием продукта, окрашенного в желтый цвет. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна количеству аллерген-специфических IgG-антител в сыворотке крови. Фотометрическое измерение проводят при 405 нм, используя для сравнения фильтр на 620 нм.

Тест RIDASCREEN® Specific IgE ELISA основан на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Аллергены нанесены на целлюлозные диски, помещенные в лунки стрипов или микропланшета. Исследуемая сыворотка, стандартная сыворотка и положительный и отрицательный контроли вносят в лунки с дисками и инкубируют при 37 °С. В процессе инкубации присутствующие в образцах IgE-антитела, специфичные к определенному аллергену, связываются с иммобилизованным аллергеном, образуя комплекс антиген-антитело. IgE-антитела, не специфичные к данному аллергену, остаются несвязанными и удаляются на стадии промывки. На второй стадии добавляют антитела к IgE человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой. Избыток несвязанного конъюгата удаляют промывкой. Затем к дискам добавляют субстрат. В результате ферментативной реакции щелочной фосфатазы бесцветный субстрат превращается в продукт желтого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию IgE-антител человека в исследуемом образце сыворотки. Оценка результата реакции производится измерением оптической плотности на планшетном спектрофотометре при основной длине волны 405 нм и референсной длине волны 620 нм. Некоторые аллергены нанесены на целлюлозные диски в присутствии человеческого сывороточного альбумина (HSA). Для таких аллергенов следует использовать дополнительный диск с сорбированным HSA, чтобы учесть вклад неспецифического связывания с HSA на аллергодиске

Отрицательный контроль во флаконе объемом 0,5 мл на 10 постановок

Положительный контроль во флаконе объемом 0,5 мл на 10 постановок

Набор реагентов предназначен для одновременного определения концентраций общих иммуноглобулинов классов G, M, A в сыворотке крови, рассчитан на проведение в дублях анализа 10 исследуемых, 5 калибровочных образцов и 1 контрольной сыворотки. Метод определения основан на твердофазном иммуноферментном анализе, принцип сэндвича, в две стадии. В состав набора входят три типа стрипов, которые различаются специфичностью иммобилизованных на внутренней поверхности лунок антител к тяжелым цепям иммуноглобулинов IgG, IgM или IgA. На первой стадии иммунонализа калибровочные и исследуемые образцы инкубируют в лунках всех 3х стрипов. Затем планшет отмывают, обрабатывают конъюгатом МКАТ к легким цепям иммуноглобулинов (каппа- и лямбда-цепи) с пероксидазой хрена. После отмывания избытка конъюгата образовавшиеся иммунные комплексы выявляют ферментативной реакцией пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена (ТМБ). Пероксидазную реакцию останавливают стоп-реагентом, измеряют оптическую плотность растворов в лунках на основной длине волны 450 нм или при референсной 620-655 нм. Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрациям IgG, IgM, IgA, значение концентрации определяют по калибровочным графикам

Тест Total IgE основан на прямом методе определения антигена ИФА. На лунках микропланшета адсорбированы моноклональные антитела к IgE человека. При первой инкубации в лунки микропланшета вносятся калибраторы, образцы сыворотки и ферментный конъюгат, содержащий антитела к IgE. В случае присутствия в образце сыворотки IgE антител, они связываются с антителами, иммобилизованными на поверхности лунок микропланшета и с антителами ферментного конъюгата, образуюя комплексы типа «сэндвич». После инкубации несвязавшийся конъюгат и моноклональные антитела удаляются промывкой. Добавление в лунки субстрата приводит к образованию окрашенного продукта, который меняет цвет на желтый при добавлении стоп-реагента, вносимого для остановки реакции. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации общего IgE в пробе. Оптическая плотность калибраторов и исследуемых образцов сыворотки измеряется фотометрически при помощи специальных микропланшетных фотометров (например, приборах линии HUMAREADER или ELISYS). Численное значение концентрации определяется с помощью калибровочной кривой

Набор стандартов на 6 постановок для построения калибровочной кривой, необходимой для количественного определения содержания аллергена

Набор калибраторов

Набор реагентов для иммуноферментного определения концентрации общего иммуноглобулина класса Е в сыворотке крови, рассчитан на проведение анализа в дубликатах 41 неизвестной, 6 калибровочных проб и 1 пробы контрольной сыворотки при одновременном использовании всех стрипов планшета (всего 96 определений). Метод определения основан на твердофазном ИФА с применением моноклональных антител. В лунках при добавлении исследуемого образца, во время первой инкубации происходит связывание молекул IgEобщ с моноклональными антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. Во время второй инкубации конъюгат моноклональных антител к IgE человека с пероксидазой связывается с IgEобщ, иммобилизованным в ходе первой инкубации. Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна концентрации IgEобщ в анализируемых пробах

Тест RIDA® AllergyScreen (панели 1, 2, 3, 4) основан на принципе ферментного иммуноанализа на нитроцеллюлозных мембранах (иммуноблотинг). Специфические аллергены, входящие в состав панели, нанесены на поверхность нитроцеллюлозных мембран (стрипов). Присутствующие в образце пациента IgE-антител, специфичных к этим аллергенам, формируют комплекс «аллерген-антитело» на твердой фазе. С этим комплексом на второй стадии инкубируют антитела к IgE человека, конъюгированных с биотином (проявляющие антитела). Для выявления образовавшихся комплексов на третьей стадии проводится инкубация с конъюгатом стрептавидина с щелочной фосфатазой. Фермент превращает бесцветный субстрат (BCIP / NBT) в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна количеству аллерген-специфических антител в сыворотке. Оценка результата производится визуально по специальному шаблону или с помощью прибора RIDA X-Screen

Тест RIDA® AllergyScreen (панели 1, 2, 3, 4) основан на принципе ферментного иммуноанализа на нитроцеллюлозных мембранах (иммуноблотинг). Специфические аллергены, входящие в состав панели, нанесены на поверхность нитроцеллюлозных мембран (стрипов). Присутствующие в образце пациента IgE-антител, специфичных к этим аллергенам, формируют комплекс «аллерген-антитело» на твердой фазе. С этим комплексом на второй стадии инкубируют антитела к IgE человека, конъюгированных с биотином (проявляющие антитела). Для выявления образовавшихся комплексов на третьей стадии проводится инкубация с конъюгатом стрептавидина с щелочной фосфатазой. Фермент превращает бесцветный субстрат (BCIP / NBT) в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна количеству аллерген-специфических антител в сыворотке. Оценка результата производится визуально по специальному шаблону или с помощью прибора RIDA X-Screen

Тест RIDA® AllergyScreen (панели 1, 2, 3, 4) основан на принципе ферментного иммуноанализа на нитроцеллюлозных мембранах (иммуноблотинг). Специфические аллергены, входящие в состав панели, нанесены на поверхность нитроцеллюлозных мембран (стрипов). Присутствующие в образце пациента IgE-антител, специфичных к этим аллергенам, формируют комплекс «аллерген-антитело» на твердой фазе. С этим комплексом на второй стадии инкубируют антитела к IgE человека, конъюгированных с биотином (проявляющие антитела). Для выявления образовавшихся комплексов на третьей стадии проводится инкубация с конъюгатом стрептавидина с щелочной фосфатазой. Фермент превращает бесцветный субстрат (BCIP / NBT) в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна количеству аллерген-специфических антител в сыворотке. Оценка результата производится визуально по специальному шаблону или с помощью прибора RIDA X-Screen

Тест RIDA® AllergyScreen (панели 1, 2, 3, 4) основан на принципе ферментного иммуноанализа на нитроцеллюлозных мембранах (иммуноблотинг). Специфические аллергены, входящие в состав панели, нанесены на поверхность нитроцеллюлозных мембран (стрипов). Присутствующие в образце пациента IgE-антител, специфичных к этим аллергенам, формируют комплекс «аллерген-антитело» на твердой фазе. С этим комплексом на второй стадии инкубируют антитела к IgE человека, конъюгированных с биотином (проявляющие антитела). Для выявления образовавшихся комплексов на третьей стадии проводится инкубация с конъюгатом стрептавидина с щелочной фосфатазой. Фермент превращает бесцветный субстрат (BCIP / NBT) в конечный продукт реакции сине-сиреневого цвета. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна количеству аллерген-специфических антител в сыворотке. Оценка результата производится визуально по специальному шаблону или с помощью прибора RIDA X-Screen

Отрицательный контроль для ИФА, во флаконе объемом 1 мл для 10 постановок

Положительный контроль для ИФА во флаконе объемом 1 мл для 10 постановок

Ферментативный аллергосорбентный тест (EAST) на специфические IgE, предназначенный для количественного измерения специфических IgE, проводится на микротитровальных планшетах. На этапе первой инкубации образцы пациентов инкубируют на дисках с иммобилизованными аллергенами. Промыванием удаляют избыток компонентов сыворотки из лунки, в то время как аллерген-специфический IgE остается связанным. Затем добавляют антитело, меченое щелочной фосфатазой, что приводит к образованию комплексов аллерген/sIgE/конъюгат антител к IgE. Снова промывают лунки, добавляют раствор субстрата (п-нитрофенилфосфата pNPP) и инкубируют с получением в итоге желтого цвета, если присутствует конъюгат. Ферментативную реакцию останавливают с помощью натрия гидроксида (NaOH), оптическую плотность (ОП) окрашенного продукта реакции измеряют спектрофотометрически на длине волны 405 нм (референсная длина волны 620 нм). Концентрация sIgE в образце пациента пропорциональна ОП. Калибровочные стандарты с известными концентрациями IgE (калиброванные по стандарту ВОЗ 75/502) анализируют одновременно с образцами пациента для получения калибровочной кривой. Неизвестные концентрации IgE в анализируемых образцах рассчитывают по данной кривой

Тестовая система Specific IgE REAST для количественного определения (в диапазоне 0.35-100 МЕ/мл) аллерген-специфических IgE-антител против биотинилированных аллергенов в сыворотке или плазме крови. Реверсивный аллергосорбентный тест основывается на методе иммуноферментного анализа типа сэндвич. На этапе первой инкубации все IgE-антитела, присутствующие в сыворотке пациента, связываются с анти-IgE-антителами, которыми сорбированы ячейки планшета. Несвязавшиеся компоненты сыворотки удаляются промывкой, тогда как IgE-антитела остаются связанными с твёрдой фазой. На этапе следующей инкубации добавляют биотинилированный аллерген и инкубируют в ячейках планшета. После следующего этапа промывки проводят детектирование связанного аллергена, используя конъюгат стрептавидин-пероксидаза хрена, образующий комплексы из специфического IgE/биотинилированного аллергена/конъюгата с пероксидазой хрена. Лунки снова промывают, добавляют раствор 3,3’,5,5’-тетраметилбензидинового ТБМ субстрата и инкубируют с получением в итоге синего цвета. Ферментная реакция останавливается добавлением 25% фосфорной кислоты, цвет меняется на желтый. Оптическую плотность (ОП) окрасившегося продукта измеряют спектрофотометрически на длине волны 450 нм (эталонная длина волны 620 нм). Концентрация sIgE в образце пациента пропорциональна оптической плотности. Калиб-рованные стандарты с известным содержанием IgE-специфических антител (калиброванные по Международному Стандарту ВОЗ 75/502) анализируют одновременно с образцами пациента для получения калибровочной кривой. Неизвестные концентрации IgE в анализируемых образцах рассчитывают по данной кривой